流感病毒研究中BeaverBeads Protein A/G 抗體純化磁珠的應用
中國科學(xué)院沈陽(yáng)應用生態(tài)研究所徐明愷團隊在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個(gè)包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導廣譜保護。
研究背景 每年流感疫情的爆發(fā)給公共安全造成巨大的威脅。一直以來(lái)，能夠應對新出現的流感病毒的疫苗都處于短缺狀態(tài)。為解決這一問(wèn)題，結合誘導交叉保護抗體反應的保守抗原與激活交叉保護T細胞反應的表位是可采取的策略之一。
中國科學(xué)院沈陽(yáng)應用生態(tài)研究所徐明愷團隊在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個(gè)包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導廣譜保護。在這次研究中，研究者設計構建了一種名叫NMHC的重組蛋白，這種蛋白包含了流感病毒的保守性表位和超級抗原片段。
NMHC重組蛋白由核蛋白NP（一種流感病毒的保守內部抗原），基質(zhì)蛋白2外域M2e（一種在甲型流感病株內高度保守的多肽），血凝素莖區HA2上高度保守的α螺旋結構和SEC2（用于強化抗原性的細菌超抗原葡萄球菌腸毒素C2）組成。研究者用BeaverBeads Protein A/G抗體純化試劑盒，對血清中抗體進(jìn)行純化，純化后的抗體與NMH形成穩定絡(luò )合物的能力，后續通過(guò)pull-down實(shí)驗來(lái)確認：將抗體與NMH孵育，用BeaverBeads Protein A/G磁珠拉下NMH。分離上清，洗脫并中和磁珠上的抗體后，用SDS-PAGE分析結合與未結合上的抗體比例。
圖.重組蛋白設計、純化、復性和驗證
研究結果顯示，重組蛋白NMHC促進(jìn)了B細胞和T細胞的對流感病毒感染的免疫反應。NMHC的SEC2端促進(jìn)了樹(shù)狀細胞的成熟，成熟的樹(shù)狀細胞將NMH端的抗原呈現給CD4+ T細胞和CD8+ T細胞。這一過(guò)程促進(jìn)了CD4+ T細胞和CD8+ T細胞的活化，增殖和分化。因此，研究者提議將NMHC作為預防多種流感的通用型疫苗備選。
BeaverBeads Protein A/G 為納米級磁性微球，適用于血漿、腹水、組織培養上清液等樣品中的抗體純化，也可以用于抗體固定及其它研究，其優(yōu)勢：
1.具有超大比表面積、超強的抗體結合力；
2.表面親水化處理，具有較低的非特異性吸附；
3.洗脫條件溫和，一步即可從血清樣品中分離出純度>90%的抗體。
配合磁性分離器，可在10min內完成抗體吸附過(guò)程，30min內完成抗體純化流程，大幅度縮短抗體純化所需的時(shí)間。此外，配合預制緩沖液，為抗體純化實(shí)驗提供了最佳的反應條件，提高了抗體純化實(shí)驗的穩定性。
