BeaverBeads? His-tag Protein Purification用于免疫印跡或考馬斯藍染色分析
該研究將細菌表達的His標記的TMED2截短體（His-TMED2）與BeaverBeads? His偶聯(lián)，然后與表達F-MITA截短體的HEK293細胞提取物一起孵育。通過(guò)用SDS上樣緩沖液煮沸洗脫與磁珠結合的蛋白質(zhì)，并進(jìn)行了免疫印跡或考馬斯藍染色分析。
武漢大學(xué)劉昱教授等在出版于Cell Reports 8.032的通過(guò)加強MITA二聚化和促進(jìn)TMED2販運，增強細胞IFN對DNA病毒的反應中總結：
由于MITA在天然免疫識別胞質(zhì)異常DNA的信號通路中的重要作用，其表達和活化的調控機制一直是研究熱點(diǎn)。該研究發(fā)現，TMED2通過(guò)增強MITA的二聚化、促進(jìn)MITA從核糖體向ER上的轉位、促進(jìn)MITA從ER向核周小泡的轉運，從而增強抗DNA病毒天然免疫反應。
該研究將細菌表達的His標記的TMED2截短體（His-TMED2）與BeaverBeadsTM His偶聯(lián)，然后與表達F-MITA截短體的HEK293細胞提取物一起孵育。通過(guò)用SDS上樣緩沖液煮沸洗脫與磁珠結合的蛋白質(zhì)，并進(jìn)行了免疫印跡或考馬斯藍染色分析。
研究人員發(fā)現敲低或敲除TMED2明顯抑制HSV-1感染誘導的MITA二聚化以及轉錄因子IRF3和NF-κB的活化，降低I型干擾素和炎癥因子的相關(guān)基因轉錄；在TMED2敲除的細胞中HSV-1復制也明顯增加，表明TMED2促進(jìn)抗DNA病毒天然免疫信號通路。進(jìn)一步的研究發(fā)現HSV-1感染誘導內源性TMED2與MITA在ER腔內發(fā)生相互作用。TMED2通過(guò)增強MITA與轉位復合體關(guān)鍵成分TRAPβ的相互作用，促進(jìn)MITA翻譯后從核糖體向ER轉位；TMED2也通過(guò)強化MITA與COPII復合物成分Sec24C的相互作用，促進(jìn)MITA經(jīng)COPII復合物組裝，由ER向高爾基體轉運。
該論文發(fā)現了MITA信號通路的新調控分子TMED2，并解析了其作用機制，為構建天然免疫信號轉導調控網(wǎng)絡(luò )提供重要支持，也為篩選抗病毒藥物的分子靶點(diǎn)提供線(xiàn)索。
圖 免疫印跡及考馬斯藍染色分析
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