技術(shù)專(zhuān)題

細胞分選是很多研究僧會(huì )遇到的實(shí)驗，選對了方法，實(shí)驗也就事半功倍，選擇哪種細胞分選方法是適合自己實(shí)驗的方法呢，今天小貍和大家具體聊聊……
細胞分選是根據細胞屬性，把一種細胞從多細胞樣品中分離出來(lái)的方法。細胞分選常見(jiàn)的方法有免疫磁珠分選、流式細胞分選、密度梯度離心、免疫密度離心，其中前兩種是最常用的細胞分選方法。那么小貍先簡(jiǎn)單叨叨這兩種方法原理與特點(diǎn)。

細胞分選原理
流式分選一般是電荷式分選，即對感興趣的目標細胞（熒光染色或標記）所在的液滴充上電荷，液滴經(jīng)過(guò)電極板，通過(guò)電場(chǎng)作用發(fā)生偏轉，從而實(shí)現分選。
磁珠分選使用磁珠偶聯(lián)的抗體去標記細胞，然后把標記好的細胞懸液置于磁場(chǎng)中，帶磁珠的細胞就留在試管里，不帶磁珠的細胞在上清中，從而實(shí)現分選。

流式分選與磁珠分選的比較

綜上，對于分選細胞數量多，或者沒(méi)有流式儀器，再或者需要保持細胞高活力的小伙伴們，磁珠分選是大家首選的方法。

無(wú)需流式儀，保持細胞高活力細胞分選方法——首選海貍磁珠法細胞分選

做磁珠分選，大家首先要根據自己的實(shí)驗目的與指標來(lái)選擇是用陽(yáng)選、陰選還是復合分選。

陽(yáng)選、陰選、復合分選
陽(yáng)性分選：運用特異性抗體偶聯(lián)磁珠直接從細胞混合物中分離目的細胞的分選方法稱(chēng)為positive?selection。陽(yáng)性分選中磁珠標記的細胞即為目的細胞。該法簡(jiǎn)單、快速、細胞得率和純度較高。如采用anti-CD14磁珠分選CD14+巨噬細胞。

陰性分選（也叫去除分選）：用抗體偶聯(lián)磁珠去除無(wú)關(guān)細胞，使目的細胞得以純化和分離的分選方法稱(chēng)為negative?selection。陰性分選中磁珠標記的細胞為非目的細胞。陰性分選法適用于：
①從細胞混合物中去除某種類(lèi)型細胞。如腫瘤細胞；
②缺乏針對目的細胞篩選的特異性抗體，如腫瘤細胞 ；
③抗體和目的細胞結合可能誘導細胞活化，影響后續細胞功能分析。

復合分選：將陰性分選和陽(yáng)性分選相結合的分選方法。適用于：
①分選非常稀有細胞，可采用陰性分選發(fā)先去除其他雜細胞，再采用陽(yáng)性分選篩選目的細胞；
②非目的細胞也表達用來(lái)陽(yáng)性選擇的抗原。
③降低細胞分選的成本，與流失分選聯(lián)合使用。（很多專(zhuān)家正在使用的方法）

對于磁珠分選方法，小伙伴們普遍用的應該是美天旎或Thermo的磁珠分選產(chǎn)品。今天小貍給大家帶來(lái)大福利，一款性?xún)r(jià)比更高的細胞分選磁珠——BeaverBeads? Streptavidin，只用普通的磁性分離架，即可進(jìn)行細胞分選，細胞去除率可到80%-90%。

大粒徑磁珠分選的實(shí)驗流程圖

利用SA磁珠固定生物素標記的抗體（可根據需要去除細胞種類(lèi)，選擇固定1種或多種抗體），室溫孵育15 min，洗滌、重懸后，即可進(jìn)行后續的細胞分選。
磁珠和細胞投入比例推薦：
50 μL磁珠（10 mg/mL）——2 μg生物素化抗體——捕獲10^6-10^7個(gè)細胞
產(chǎn)品圖片：

訂購信息

使用海貍SA磁珠已發(fā)表文章：
1、NATURE IMMUNOLOGY  卷: 16   期: 9   頁(yè): 991-999   出版年: SEP 2015
The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of TFH cells during acute viral infection
2、Immunity  47, 538–551  2017.08
The Kinase mTORC1 Promotes the Generation and Suppressive Function of Follicular Regulatory T Cells
3、Frontiers in Immunology   Volume 9 ， Article 1127 ，May 2018
The Kinase complex mTOR complex2 Promotes the Follicular Migration and Functional Maturation of Differentiated Follicular Helper CD4+ T cells During Viral infection