蛋白純化——His標簽與GST標簽知多少？
His與GST標簽特點(diǎn)，了解一下
海貍蛋白純化磁珠試用活動(dòng)正在如火如荼進(jìn)行中，在標簽蛋白純化過(guò)程中，合適的標簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時(shí)也不能影響蛋白的結構功能和下游應用。小編今天和大家聊一聊主要的標簽蛋白——HIS與GST標簽特點(diǎn)。
HIS-Tag（組氨酸標簽）
HIS-Tag 由6-10 個(gè)組氨酸殘基組成，分子量不到0.84KD，通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。HIS-Tag是目前原核表達最常用的標簽，蛋白純化完之后可以不需切除此標簽，也不會(huì )對蛋白產(chǎn)生功能影響。同時(shí)，蛋白純化步驟簡(jiǎn)便，純化條件溫和，對蛋白也不會(huì )產(chǎn)生太大影響。HIS-Tag 蛋白純化的首選標簽。
HIS-Tag 本身的特性對目的蛋白沒(méi)有影響，不會(huì )形成二聚體；
分子量較小，只有0.84KD，對蛋白的下游應用不會(huì )產(chǎn)生影響；
免疫原性低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫并制備抗體；
HIS-Tag 與細菌的轉錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達；
可與其他標簽構建雙標簽表達，可用于多種蛋白表達系統，純化條件溫和對蛋白影響較小。
海貍His-tag蛋白純化磁珠以磁性瓊脂糖微球為基質(zhì)，活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸（IDA）,分別螯合鎳離子（Nickel）、鈷離子（Cobalt）兩種金屬離子，組氨酸殘基側鏈與金屬離子（鎳/鈷離子）有強烈吸引力，可通過(guò)磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，海貍HIS-Tag蛋白純化磁珠純化蛋白純度高于85%。
GST-Tag 相對分子質(zhì)量較大，約為26KD，插入在目的蛋白的C 末端或N 末端，大腸桿菌中常用在N 端。GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 蛋白本身是一個(gè)在解毒過(guò)程中起到重要作用的轉移酶。一般選擇GST 標簽的目的有兩個(gè)，一是提高蛋白表達的可溶性，二是提高蛋白的表達量。蛋白表達純化結束后需根據不同的蛋白應用而確定是否切除標簽，標簽較大，切除與否需根據下游應用考慮。如果要去除GST 融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST 抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。
增加外源蛋白的可溶性；
可在不同的宿主中表達，適用范圍廣；
可用不同的蛋白酶可以方便去除；
很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的穩定性；
高特異性，純化方便且溫和；
分子量較大，可能會(huì )影響蛋白質(zhì)的功能和下游實(shí)驗；
如果蛋白不可溶，很難用變性的方法純化。
海貍GST融合蛋白純化磁珠，通過(guò)磁珠偶聯(lián)谷胱甘肽(GSH)，利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉移酶之間酶和底物的特異性作用力，分離出帶有GST標簽的蛋白，純化蛋白的純度達到90%。
海貍磁珠法蛋白純化
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